原代細(xì)胞培養(yǎng)問題：
 

　　1、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？
 

　　根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的最大生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。
 

　　細(xì)胞系是不斷生長、分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。
 

　　但實(shí)際上，經(jīng)過長時(shí)間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
 

　　需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會(huì)有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群，除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。
 

　　2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？
 

　　倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。
 

　　3、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？
 

　　收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃，這樣會(huì)對細(xì)胞造成不可挽回的傷害。
 

　　4、凍存的細(xì)胞該如何開始培養(yǎng)？
 

　　(1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。
 

　　(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
 

　　(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
 

　　(4) 用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
 

　　(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負(fù)壓，開蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出，這是正常現(xiàn)象)。
 

　　(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。
 

　　(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。
 

　　(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃，5%CO2，95%空氣)
 

　　(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。
 

　　5、細(xì)胞培養(yǎng)過程中，多久更換一次培養(yǎng)基？
 

　　這取決于細(xì)胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
 

　　注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞。
 

　　6、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎？
 

　　這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。
 

　　然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。
 

　　7、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？
 

　　我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。