293細(xì)胞購(gòu)入時(shí)建議先大量?jī)龃?/h1>

更新時(shí)間：2021-08-24瀏覽：1530次

　　293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系，293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生，同時(shí)表達(dá)SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區(qū)的質(zhì)?？梢詮?fù)制。用Ca3(PO4）2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測(cè)到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過(guò)表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。

　　通常轉(zhuǎn)染效率與代數(shù)相關(guān)，建議選擇代數(shù)低的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果質(zhì)粒中含SV40復(fù)制起始點(diǎn)，可以選擇293T或293T/17。這些細(xì)胞貼壁不牢，特別是溫度低于30攝氏度時(shí)很容易卷曲脫落，建議使用Cellbind細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

　　293細(xì)胞培養(yǎng)特性：

　　1、293細(xì)胞明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時(shí),可順利貼壁生長(zhǎng),換液時(shí)動(dòng)作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。

　　2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長(zhǎng)良好細(xì)胞，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個(gè)懸浮細(xì)胞即可。12小時(shí)-24小時(shí)90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時(shí)機(jī)為達(dá)80-90%匯合，傳代比例為1：3。

　　3、293細(xì)胞在低代時(shí)容易貼壁，生長(zhǎng)良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團(tuán)，且貼壁不牢，用PBS沖洗時(shí)即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細(xì)胞懸液，購(gòu)入時(shí)先大量?jī)龃妗?/div>

　　4、復(fù)蘇：293細(xì)胞的另一生長(zhǎng)特性是貼壁所需時(shí)間長(zhǎng)且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時(shí),都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的70%～80%時(shí)消化凍存,復(fù)蘇時(shí)將其全部接種至2個(gè)50ml瓶中時(shí)較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢，復(fù)蘇接種后24小時(shí)內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動(dòng)而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時(shí)左右觀察貼壁情況并進(jìn)行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。

 

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